除了两位水管工兄弟,游戏中的经典角色也在电影中亮相。碧姬公主作为蘑菇王国意志坚定的统治者,在片中对马力欧进行了严酷的作战训练,以帮助后者挖掘自身潜力。喜剧演员杰克·布莱克、塞斯·罗根则为片中的大反派酷霸,以及“搞笑担当”大猩猩咚奇刚配音。值得一提的还有,为游戏中的马力欧和路易吉兄弟配音长达三十余年的查尔斯·马丁内斯,也在片中友情客串。在今日的预告片中,外星人福福首次吐露自己的心声,虽然他出生在一个崇尚武力的星球,但心中却一直怀抱着守卫和平的愿望,在地球与动物们相处的日夜,更是让他感受到了友情的温暖。但福福的爸爸——玄武星首领福天霸却不这样认为,他亲自带领强大的玄武星部队,朝着地球进攻。